1. 包被過程(注意設置空白對照，陰性對照)：
elisa試劑盒檢測步驟將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg)，每孔抗原加入100μl， 置37℃，4h，或4℃，24h；棄去孔中液體。(為避免蒸發，板上應加蓋或將板平放在底部有濕紗布的金屬濕盒中)
2. 封閉酶標反應孔：
5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應孔，并去除各孔中的氣泡，封閉結束后用洗滌液滿孔洗滌3遍，每遍3min。
洗滌方法：吸干孔內反應液，將洗滌液注滿板孔，放置2min略作搖動，吸干孔內液，傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌次數3次
3. 加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度)：
檢測時一般采用1：50-1：400的稀釋度， 應采用較大稀釋體積進行，一般保證樣品吸取量>20μl。
將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中，每樣品至少加雙孔， 每孔100μl，置于37℃，40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍，每遍3min。
4. 加入酶標抗體：
酶標抗體： 根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行. 37℃，30-60min之間.短于30min往往結果不穩定.每孔加100μl.洗滌同前。
5. 加入底物液(現用現配)：
shou選TMB-過氧化氫尿素溶液，OPD-過氧化氫底物液系統次之。
底物加入量：每孔100μl，置37℃避光放置3-5分鐘，加入終止液顯色。
6. 終止反應：
每孔加入終止液50μl終止反應，于20min內測定實驗結果。
7. 結果判斷：
OPD顯色后采用492nm波長，TMB反應產物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首先進行空白孔系統調零。用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示，當P/N大于2時作為抗體的效價.(數值的大小依具體檢測要求而定.)elisa試劑盒檢測步驟
